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李斯特菌檢測板

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食安科技李斯特菌檢測板肉類/肉制品/蛋制品/飲料類/表面衛(wèi)生等中李斯特氏菌的快速檢測

1、李斯特菌檢測板原理及適用范圍

李斯特菌檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基,選擇性試劑,冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU ),李斯特菌檢測板適用于檢測或者計數(shù)食品及環(huán)境樣品中的李斯特菌菌數(shù)。李斯特菌檢測板檢測的李斯特菌包括單核細胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes),英諾克李斯特菌(Listeria.innocua),威氏李斯特菌(Listeria.welshi),但不能區(qū)分各種菌。

2、李斯特菌檢測板操作方法

2.1 食品樣品檢測

2.1.1  食品樣品處理:取樣品25 g(mL)放入裝有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi),制成1:10的樣品勻液。根據(jù)樣品污染程度及檢驗需要,可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液,選擇2~3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)來進行接種。

2.2 環(huán)境樣品檢測

2.2.1  環(huán)境樣品采集:用無菌的涂抹棒或其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣品。濕潤采樣設(shè)備液體體積≤10mL。濕潤劑可以為無菌水,滅菌生理鹽水(磷酸鹽緩沖液)或者緩沖蛋白胨水。

2.2.2  環(huán)境樣品處理:在收集的環(huán)境樣品中添加10mL 滅菌生理鹽水(或磷酸鹽緩沖液),充分混勻。根據(jù)樣品污染程度及檢驗需要,可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液,選擇2~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)來進行接種。

2.3 接種:將李斯特菌檢測板上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開,用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液均勻滴加到紙片上,迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,靜置10s左右,待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復(fù)。

2.4 培養(yǎng):將檢測板疊在一起,倒置于36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),培養(yǎng)18~24h

3、結(jié)果判讀

在檢測板上生長的藍綠色點即為李斯特菌陽性點,若檢測板上無菌生長或者長出點為其他顏色點即為李斯特菌陰性。

李斯特菌檢測板

4  計數(shù)原則及報告方式

4.1  樣品計數(shù)

4.1.1 以生長有30~300CFU的檢測板為計數(shù)適宜范圍。

4.1.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數(shù)在計數(shù)合適范圍30~300CFU之間,則計算兩個檢測板菌落數(shù)的平均值,再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),作為每克(毫升)中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.1.3 若有兩個連續(xù)稀釋度在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,按式(1)計算:

                    ∑C

              N= ————————       •••••••••••••••••••(1)

                  (n1+0.1n2)d

  式中:

  N——樣品中李斯特菌菌落數(shù);

  ∑C——兩個連續(xù)稀釋度檢測板(含適宜范圍菌落數(shù)的檢測板)李斯特菌落數(shù)之和;

  n1——適宜范圍菌落數(shù)的*個稀釋度(低)檢測板個數(shù);

  n2——適宜范圍菌落數(shù)的第二個稀釋度(高)檢測板個數(shù);

  d——*稀釋度的稀釋倍數(shù)

示例:


結(jié)果表述為2.5×103CFU/g(mL)。

4.1.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長,則以小于1/d(d—zui低稀釋倍數(shù))計算。

4.1.5 低數(shù)值的估算:如果實驗樣品原液(水及液體飲料)或初始稀釋懸液(其他樣品)的兩個檢測板上的菌落數(shù)均小于30CFU,計算兩個檢測板上的菌落數(shù)的平均數(shù)。計算式(2):

                   ∑C

                 NE = ——    •••••••••••••••••••(2)

                       nd

式中:

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值;

∑C——兩個檢測板上菌落數(shù)的和;

n——檢測板的數(shù)量;

d——樣品初始懸液或?qū)嶋H接種懸液的稀釋倍數(shù)。

4.1.6 大數(shù)值的估算:若所有稀釋度的檢測板上菌落數(shù)均大于300CFU,計數(shù)zui接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數(shù),其他檢測板可記錄為多不可計。結(jié)果計算式(3):

                    ∑C

               NE = —— •••••••••••••••••••(3)

                     nd

式中:

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值;

∑C——兩個檢測板上菌落數(shù)之和;

n——檢測板的數(shù)量;

d——與樣品懸液相*的稀釋倍數(shù)。

5、結(jié)果報告

固體樣品以CFU/g為單位報告,液體樣品以CFU/mL為單位報告。

6、附加說明

注意使用過的檢測板上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。



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